Fragmentanalyse -Instrument

Um eine Mischung aus DNA -Fragmenten zu extrahieren, durch ein PCR -Instrument, um eine einfache Reinigung durchzuführen. Entfernen Sie das freie fluoreszierende DDNTP -Einzelnukleotid und lassen Sie ein DNA -Fragment einer bestimmten Länge, die auf der Maschine sequenziert werden kann. Eine Polyacrylamidlösung wird zuerst während des Sequenzierungsprozesses in eine hohle Kapillare injiziert. Dann wurde die Polyacrylamidlösung durch UV -Lichtbestrahlung ionisiert, um eine Polymerisationsreaktion zu erzeugen. Das Polyacrylamidgel erzeugt einen Trenneffekt unter dem elektrischen Feld, um die Elektrophorese von Nucleotid zu starten. Die elektrophoretische Bewegung von kurzen DNA -Fragmenten ist schnell und die elektrophoretische Bewegung langer DNA -Fragmente ist langsam. Die Mischung von DNA -Fragmenten bewegt sich von einer negativen Ladung zu einer positiven Ladung unter der Wirkung eines elektrischen Feldes in einer Kapillare, die ein Polyacrylamidgel enthält. Das positive Ende der Kapillare wird mit einem Festkörperlaser bestrahlt, und ein spektroskopischer optischer Sensor zeichnet die verschiedenen Fluoreszenzintensitäten auf. Jedes DNA -Fragment hat beim Durchlaufen des Laser -Scanpunkts eine fluoreszierende Gruppe, die eine bestimmte fluoreszierende Farbe abgibt.

Da im vorherigen Polymerisationsreaktionsprozess der Startpunkt der Polymerisationsreaktion mit einer bestimmten Primerposition beginnt. Daher ist das DNA -Fragment, das zuerst den Laser -Scanpunkt der Elektrophorese erreicht, das kürzere Fragment, sodass seine Polymerisations -Terminierungsposition näher an der Polymerisationsstartposition liegt. Daher reflektiert die fluoreszierende Farbe, welcher der Basen am 3 'Ende a, t, c und g ist.

Umgekehrt erreicht die Elektrophorese von DNA -Fragmenten den Laser -Scanpunkt, je länger die DNA -Fragmente. Infolgedessen liegt die Kündigungsstelle weiter von der Ausgangsposition des Primers entfernt. Schließlich wird eine Karte mit vier Farben erhalten.