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Die Verwendung eines 5-Kanal-Thermocycler-PCR-Echtzeit-QPCR-PCR

2023-07-17

Real Time Pcr

Die Verwendung einer 5-Kanal-Thermocycler-PCR-Echtzeit-QPCR-PCR umfasst die folgenden Schritte:

1. Probenvorbereitung: DNA oder RNA aus der biologischen Probe von Interesse extrahieren. Dies kann unter Verwendung verschiedener Methoden wie Phenol-Chloroform-Extraktion, Säulenbasis oder magnetischer Perlenbasis erfolgen.
2. Primer- und Sondendesign: Entwurf spezifische Primer und Sonden, die an die Zielsequenz von Interesse binden. Diese Primer und Sonden werden typischerweise mit Softwaretools entwickelt, die Faktoren wie Schmelztemperatur, GC -Inhalt und Spezifität berücksichtigen.
3. PCR -Reaktionsaufbau: Erstellen Sie den PCR -Reaktionsmix, indem Sie die DNA- oder RNA -Template, Primer, Sonden und andere notwendige Komponenten wie Nukleotide, Puffer und Polymerase kombinieren. Der Reaktionsmix wird dann in die Brunnen der PCR -Platte verteilt.
4. Thermocycling: Legen Sie die PCR-Platte in den 5-Kanal-Thermocycler, der mehrere Proben gleichzeitig aufnehmen kann. Der Thermocycler durchläuft dann eine Reihe von Temperaturzyklen, einschließlich Denaturierung, Annealing und Ausdehnung, um die Ziel -DNA- oder RNA -Sequenz zu verstärken.
5. Echtzeitüberwachung: Der 5-Kanal-Thermocycler ist mit Fluoreszenzerkennungsfunktionen ausgestattet. Während jedes Temperaturzyklus erkennt der Thermocycler die von der markierte Sonde emittierte Fluoreszenz, die sich an die amplifizierte DNA oder RNA bindet. Dies ermöglicht eine Echtzeitüberwachung des Verstärkungsprozesses.
6. Datenanalyse: Die Echtzeit-Fluoreszenzdaten werden mit einer speziellen Software gesammelt und analysiert. Die Software berechnet den Zyklusschwellenwert (CT), der die Zyklusnummer darstellt, bei der das Fluoreszenzsignal einen vordefinierten Schwellenwert überschreitet. Der CT -Wert wird verwendet, um die anfängliche Menge an Ziel -DNA oder RNA in der Probe zu quantifizieren.
7. Dateninterpretation: Die aus dem 5-Kanal-Thermocycler erhaltenen CT-Werte können zwischen verschiedenen Proben oder experimentellen Bedingungen verglichen werden. Dies ermöglicht die Quantifizierung der Genexpressionsniveaus, den Nachweis spezifischer Mutationen oder genetische Variationen oder die Messung der Viruslast unter anderem.
Insgesamt ist die 5-Kanal-Thermocycler-PCR-Echtzeit-QPCR-PCR ein leistungsstarkes Instrument für verschiedene molekulare Biologieanwendungen und bietet eine schnelle und genaue Quantifizierung von Nukleinsäuren.

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